transcription-polymerase chain reaction-guided cloning strategy was employed to obtain genes encoding pinoresinol-lariciresinol reductases from western red cedar (Thuja plicata) as a means to initiate the study of its heartwood formation. (+)-Pinoresinol-(+)-lariciresinol reductase from Forsythia intermedia was used as a template for primer construction for reverse transcription-polymerase chain reaction amplifications
尽管木本植物的心材代表了纤维和实木产品的主要来源,但对于导致其形成的
生物过程是如何开始和调控的,基本上一无所知。因此,采用逆转录-聚合酶链反应指导的克隆策略从西部红柏(Thuja plicata)获得编码
松脂醇-lariciresinol还原酶的
基因,作为开始研究其心材形成的手段。连翘中的(+)-
松脂醇-(+)-lariciresinol还原酶用作反转录-聚合酶链反应扩增引物构建的模板,随后进行同源杂交克隆,可分离出两种不同的来自西部红柏的推定的
松脂醇-lariciresinol还原酶cDNA克隆。每个类别的代表表示为与
β-半乳糖苷酶的融合蛋白,并进行酶活性测定。使用
氘化和放射性标记的(+/-)-
松脂醇作为底物,可以确定每一类cDNA编码具有不同(相反)对映体特异性的
松脂醇-lariciresinol还原酶。显着地,来自一类的蛋白质将(+)-
松脂醇转变为(-)-异豆油
松香醇,而另一种则利用