嘌呤霉素 | 53-79-2

• 物质功能分类: 原料药 - 抗生素类药物 - 其它抗生素类药
• 分子结构分类: 有机化合物 - 核苷、核苷酸和类似物 - 嘌呤核苷
• 中文名称: 嘌呤霉素
• 中文别名: 嘌呤霉素二盐酸盐水合物
• 英文名称: puromycin
• 英文别名: Puro；Stylomycin；(2S)-2-amino-N-[(2S,3S,4R,5R)-5-[6-(dimethylamino)purin-9-yl]-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl]-3-(4-methoxyphenyl)propanamide
• CAS: 53-79-2
• 化学式: C₂₂H₂₉N₇O₅
• 分子量: 471.516
• InChiKey: RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N

物化性质

• 熔点：
  175.5-177°
• 比旋光度：
  D25 -11° (ethanol)
• 沸点：
  572.65°C (rough estimate)
• 密度：
  1.3119 (rough estimate)
• 物理描述：
  Puromycin dihydrochloride is a white powder. (NTP, 1992)
• 溶解度：
  Soluble (NTP, 1992)

计算性质

• 辛醇/水分配系数(LogP)：
  0
• 重原子数：
  34
• 可旋转键数：
  8
• 环数：
  4.0
• sp3杂化的碳原子比例：
  0.45
• 拓扑面积：
  161
• 氢给体数：
  4
• 氢受体数：
  10

安全信息

• 危险等级：
  6.1(b)
• 危险品运输编号：
  UN 3249
• 包装等级：
  III
• 危险类别：
  6.1(b)
• 储存条件：
  库房应保持通风、低温和干燥，并将该物品与其他氧化剂和食品添加剂分开存放。

制备方法与用途

理化性质

嘌呤霉素（Puromycin）是由白黑链霉菌（Streptomyces alboniger）发酵代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素，分子式为C22H29O5N。无色晶体状，熔点在175～177℃之间，水溶液对石蕊试纸呈碱性反应。通过抑制蛋白质合成而杀死革兰氏阳性菌，并且对革兰氏阳性和阴性的细胞、锥虫、阿米巴原虫和肿瘤细胞等都有抑制作用。嘌呤霉素用于治疗阿米巴感染及某些类型的肿瘤病。

使用方法 建议使用浓度

• 哺乳动物细胞：建议浓度为1-10 μg/mL，具体浓度需通过杀灭曲线确定。
• 大肠杆菌：在LB琼脂培养基中筛选稳定转化的pac基因的大肠杆菌时，使用浓度为125 μg/mL。注意，使用嘌呤霉素筛选大肠杆菌稳转株需要精确控制pH值，并受宿主细胞本身影响。

溶解方法

• 用蒸馏水配制50 mg/ml母液，并经过0.22 μm滤膜除菌后分装并冷冻保存。
• 可以将嘌呤霉素溶于甲醇，配置成10 mg/mL的储存液。

嘌呤霉素杀灭曲线确定

• 根据细胞类型、生长状态、密度、代谢情况及所处细胞周期位置等不同因素，有效筛选浓度有所差异。建议初次实验时应建立适合自身实验体系的杀灭曲线。
  • Day 1：在24孔板内以5~8 x 10^4 cells/孔的密度铺板，并过夜培养；
  • Day 2：
    • 准备筛选培养基（含不同浓度嘌呤霉素的新鲜培养基，如0-15 μg/mL）；
    • 更换培养基并继续37℃孵育细胞；
  • Day 4：更换新鲜的筛选培养基，并观察细胞存活率；
  • 每日监测细胞存活率以确定有效药物浓度。

哺乳动物稳定转染细胞株的筛选

• 转染含有pac基因的质粒后，将细胞置于含嘌呤霉素的新鲜培养基中增殖，筛选出稳定转染子。
  • Day 1：铺板并过夜；
  • Day 2：
    • 准备不同浓度的筛选培养基（如0-15 μg/mL）；
    • 更换含有适当浓度嘌呤霉素的新鲜培养基；
  • 第4天起：每隔2-3天更换含有嘌呤霉素的培养基，并观察细胞存活情况。
  • Day 7后：评估细胞病灶形成，转移5-10个抗性克隆到35mm的培养皿中继续筛选。

类别

• 有毒物品
• 毒性分级：剧毒
• 急性毒性：
  • 口服：小鼠LD50为20毫克/公斤；
  • 腹腔注射：小鼠LD50为25毫克/公斤。
• 可燃性危险特性：明火燃烧时会释放有毒氮氧化物烟雾
• 储运特性：
  • 库房应保持通风、低温及干燥；
  • 需与氧化剂和食品添加剂分开存放。

灭火剂

• 二氧化碳、泡沫、干粉或砂土、雾状水。

反应信息

• 作为反应物：
  描述：

  嘌呤霉素 在 吡啶 、 二氯乙酸 、 4-二甲氨基吡啶 、 三乙胺 作用下， 以 二氯甲烷 、 乙腈 为溶剂， 生成 (2R,3R,4R,5S)-4-((S)-2-((((9H-fluoren-9-yl)methoxy)carbonyl)amino)-3-(4-methoxyphenyl)propanamido)-2-(6-(dimethylamino)-9H-purin-9-yl)-5-(hydroxymethyl)tetrahydrofuran-3-yl acetate
  参考文献：
  名称：

  DNA display for drug discovery

  摘要：

  一种基于新的嘌呤霉素修饰剂的新型 DNA 展示策略已经开发出来。合成5'端嘌呤霉素连接的寡核苷酸与mRNA杂交，使其能够在体外翻译过程中攻击新生的多肽。 DNA-肽融合分子可以耐受更苛刻和严格的选择条件，因此，这种DNA展示可能成为体外展示技术选择肽类药物候选物的有用工具。

  DOI：

  10.1039/c3ra42440e
• 作为产物：
  描述：

  N-苄氧羰基-L-酪氨酸 在 palladium on activated charcoal 氢气 、 双(2-氧代-3-恶唑烷基)次磷酰氯 、 sodium hydride 、 N,N-二异丙基乙胺 作用下， 以