L-lactate dehydrogenase | 9001-60-9

• 物质功能分类: 食品添加剂 - 酶制剂
• 分子结构分类: 氧化还原酶 - 作用于CH-OH供体组 - 以NAD+或NADP+为受体
• 英文名称: L-lactate dehydrogenase
• 英文别名: lactic acid dehydrogenase；L(+)-nLDH；L-(+)-lactate dehydrogenase；L-lactic dehydrogenase；L-lactic acid dehydrogenase；lactate dehydrogenase；lactate dehydrogenase NAD+-dependent；lactic dehydrogenase；NAD+-lactate dehydrogenase
• CAS: 9001-60-9

安全信息

• 安全说明：
  S22,S24/25,S26,S36/37
• 危险类别码：
  R21/22,R36/37/38
• WGK Germany：
  3
• 海关编码：
  35079090

制备方法与用途

概述

L-乳酸脱氢酶是一种糖酵解酶，广泛存在于机体所有组织细胞的胞质内，其中以肾脏含量较高。它能催化丙酮酸生成乳酸，在动物或微生物体中，利用NADH作为辅酶，将丙酮酸通过生化反应转化为乳酸，因此在乳酸菌发酵过程中扮演关键角色。

制备方法

于1mL离心管中加入300μL菌悬液（含30mg湿菌体）和250μL磷酸钠缓冲液（pH 7.0），37℃保温5分钟，再依次添加50μL葡萄糖（终浓度为50mmol/L）和400μL苯丙酮酸（终浓度10mmol/L）。反应维持1小时后，取200μL反应液加入800μL甲醇终止反应，并通过0.22μm有机滤膜进行HPLC分析。另取200μL反应液，用1mL乙酸乙酯萃取，上层有机相经无水硫酸钠干燥后再次过0.22μm有机滤膜，用于对映选择性分析。

结果显示，当体系反应40分钟后，L-PLA的浓度为5.62mmol/L，产率为56.2%，ee值大于99%；在反应进行80分钟时，苯丙酮酸完全被消耗，生成了8.59mmol/L的L-乳酸脱氢酶，产率达到了85.9%，ee值同样大于99%。

化学性质

L-乳酸脱氢酶以类白色冻干粉或3.2mol/L硫酸铵结晶悬浮液形式存在，易溶于水，其pI为4.6，最适pH值为6.0。结晶酶溶液在6至8周内活性保持不变，而硫酸盐悬浮液可稳定一年以上，极稀溶液不稳定。最适宜的温度为39℃，高于60℃时会迅速失活。抑制剂包括过量的丙酮酸、NAD、草酸、草酰胺、羟基丙二酸、丙二酸、尿素、Cu²⁺、Hg²⁺、Ag⁺、4-氯汞苯甲酸、焦磷酸或碱性条件下从辅酶I（NAD）形成的非竞争性抑制剂，以及过量的乳酸和还原辅酶I（NADH）形成的非竞争性抑制剂。激活剂包括2-氨基-2-甲基-1-丙醇、氟化物、二乙醇胺和肝素。酶反应方程式为：丙酮酸盐+还原辅酶I+H⁺→乳酸盐+辅酶I。

用途

L-乳酸脱氢酶广泛应用于生化研究，可用于检测丙酮酸，并对白血病及心肌梗死的诊断具有重要价值。常用作心肌梗死及白血病的诊断工具，用于鉴定丙酮酸含量。

生产方法

以猪心为原料，经磷酸钙凝胶处理、硫酸铵分级沉淀后，再通过透析和硫酸铵结晶得到产品。另一种生产方法同样使用猪心作为原料，经过相同的处理步骤制备最终的产品。

反应信息

• 作为试剂：
  描述：

  4-溴苯乙酮 在 glucose dehydrogenase 、 D-丙氨酸 、 transaminase ATA-117 、 β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 、 sodium hydroxide 、 L-lactate dehydrogenase 作用下， 反应 5.0h， 生成 (R)-(+)-1-(4-溴苯基)乙胺
  参考文献：
  名称：

  A fast and sensitive assay for measuring the activity and enantioselectivity of transaminases

  摘要：

  一种快速且灵敏的筛选方法，利用D-和L-氨基酸氧化酶来评估转氨酶活性和对映选择性，使得新型胺底物能够被迅速识别。

  DOI：

  10.1039/c0cc02919j