甘油醛-3-磷酸脱氢酶来源于面包酵母(酿酒酵母) | 9001-50-7

• 物质功能分类: 生物化工 - 酶及辅酶类
• 分子结构分类: 氧化还原酶 - 作用于供体的醛基或氧基 - 以NAD+或NADP+为受体
• 中文名称: 甘油醛-3-磷酸脱氢酶来源于面包酵母(酿酒酵母)
• 中文别名: 甘油醛-3-磷酸脱氢酶来源于兔肌肉；甘油醛-3-磷酸脱氢酶；甘油醛-3-磷酸脱氢酶来源于鸡肌肉；D-甘油醛-3-磷酸:NAD+氧化还原酶(磷酸化)；甘油醛-3-磷酸脱氢酶来源于人类红细胞；3-磷酸甘油醛脱氢酶
• 英文名称: glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (phosphorylating)
• 英文别名: triosephosphate dehydrogenase (ambiguous)；glyceraldehyde phosphate dehydrogenase；phosphoglyceraldehyde dehydrogenase；3-phosphoglyceraldehyde dehydrogenase；NAD+-dependent glyceraldehyde phosphate dehydrogenase；glyceraldehyde phosphate dehydrogenase (NAD+)；glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (NAD+)；NADH-glyceraldehyde phosphate dehydrogenase；glyceraldehyde-3-P-dehydrogenase
• CAS: 9001-50-7

物化性质

• 稳定性/保质期：
  悬浮于3.2mol/L硫酸铵溶液（含0.1mmol/L EDTA）中。在5℃条件下，悬浮液可保存数月而活力不变；定时更换新介质可长期保持活性不变；结冻或解冻会导致失活。

安全信息

• 危险品标志：
  B,Xi
• 安全说明：
  S26,S36
• 危险类别码：
  R36/37/38
• WGK Germany：
  3

制备方法与用途

制备

CN201711376257.7提供了3-磷酸甘油醛脱氢酶及其多克隆抗体。从细菌中获得了这种具有低温酶特性的3-磷酸甘油醛脱氢酶，并制备得到相应的多克隆抗体，能够准确检测3-磷酸甘油醛脱氢酶。本发明之一是提供该酶的氨基酸序列，SEQ ID NO.1所示；另一目的是提供编码此酶基因的碱基序列，SEQ ID NO.2所示；第三则是提供一种3-磷酸甘油醛脱氢酶多克隆抗体制备方法。

具体步骤如下：

1. 以氨基酸序列为SEQ ID No.1的3-磷酸甘油醛脱氢酶为抗原，免疫小鼠制备抗血清；
2. 纯化抗血清得到3-磷酸甘油醛脱氢酶多克隆抗体。 进一步地，该3-磷酸甘油醛脱氢酶的制备方法包括： 1.1) 利用PCR技术扩增碱基序列为SEQ ID NO.2的片段； 1.2) 将该片段克隆入载体质粒中构建表达载体； 1.3) 将表达载体转化大肠杆菌感受态菌体，得到重组菌体，通过扩大培养、诱导表达、收集菌体、破碎菌体和纯化蛋白等过程制备3-磷酸甘油醛脱氢酶蛋白。图3为重组菌株Ecoli BL21-pET21a-GPR表达3-磷酸甘油醛脱氢酶蛋白的聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定图，显示了目标蛋白的存在。

作用

3-磷酸甘油醛脱氢酶在糖代谢中扮演关键角色，催化3-磷酸甘油醛氧化和磷酸化生成1,3-二磷酸甘油酸。它广泛分布于人体各组织器官中，脂肪组织含量较低，肺、肝、心等含酶量较高，骨骼肌、红细胞和肾中的含量最为丰富。急性肝炎、酒精性肝病、肝硬化等情况可导致血清GAPD总活性升高；慢性肾盂肾炎、多发性骨髓病、肺炎、肺气肿等病人血清GAPDA活性也呈不同程度的升高。

应用

3-磷酸甘油醛脱氢酶的应用前景广阔。作为糖代谢的关键环节，它对于体内缺乏此酶而导致糖代谢问题的患者具有治疗潜力；通过对该酶活性检测可帮助推断疾病状态，从而为疾病的预防提供重要依据。

化学性质

这种物质呈白色结晶状，在3.2mol/L硫酸铵溶液（含0.1mmol/L EDTA）中悬浮。在5℃条件下，悬浮液可以保存数月而不失活力；定时更换新介质可长期保持其活性；结冻或解冻则会导致酶失活。每个甘油醛-3-磷酸脱氢酶分子含有约3.8-4.0个高活性的半胱氨酸残基，并能与4分子辅酶I（NAD+）或还原辅酶I（NADH）结合，催化反应如下：D-甘油醛-3-磷酸 + 辅酶I + 无机磷 → 1,3-二磷酸-D-甘油酸 + 还原辅酶I。

用途

用于测定ATP与甘油-3-磷酸偶联反应的生化研究，临床常用作诊断酶以直接测定磷酸甘油酸激酶的活力。

生产方法

主要从免肌为原料，经KOH提取、硫酸铵分级分离后，再通过Sephadex G-50柱层析和CM-Sephadex柱层析，最终得到硫酸铵沉淀和重结晶产品。