Biosynthesis of Puromycin in
Streptomyces alboniger
: Regulation and Properties of
O
-Demethylpuromycin
O
-Methyltransferase
摘要:
白链霉菌中嘌呤霉素生物合成的调控机制
嘌呤霉素生物合成的调控机制
的水平进行了研究。
S
-腺苷
l
-蛋氨酸的水平进行了研究:
O
-去甲基金霉素
O
-甲基转移酶。在玉米浸液-玉米淀粉培养基和 Hickey-Tresner 培养基中生长的细胞,每毫克蛋白质的最大比活度分别为 0.7 和 0.1 nmol/min。在这两种培养基中
O
-甲基转移酶活性从低水平上升到对数生长中期的最大值,然后在静止期下降或完全消失(在 Hickey-Tresner 培养基中)。葡萄糖(1%)或溴化乙锭(5 μM)都会降低
O
-甲基转移酶的形成降至极低水平,但对整体生长没有影响。在琼脂上,葡萄糖完全抑制了抗生素的形成。在存在溴化乙锭的情况下生长的细胞在没有染料的情况下重新生长后继续产生低水平的酶,但在 Hickey-Tresner 琼脂上形成正常数量的嘌呤霉素。嘌呤霉素
O
无论是粗制的还是纯化的 O-甲基转移酶,在 37 C 下都会迅速失活。嘌呤霉素对转移酶有抑制作用。调节
O
-甲基转移酶合成的调节
甲基转移酶合成的调控
O -甲基转移酶合成的调控包括:(i) 生长早期的诱导,这种诱导易受代谢物抑制和溴化乙锭的不同抑制作用的影响;(ii) 细胞内底物水平的增加保护酶失活。(ii)细胞内底物水平的增加保护酶失活。
O
-通过硫酸原胺沉淀、硫酸铵分馏、二乙胺基乙基纤维素吸附和梯度盐洗脱以及 Sephadex G-200 凝胶过滤,O-甲基转移酶纯化了 30-40 倍。在盐分馏步骤之后的纯化过程中,该酶即使在低温下也非常不稳定,但加入
S
-腺苷
l
-蛋氨酸可使其稳定。