含马铃薯蛋白样
磷脂酶结构域的蛋白 1 (
PNP
LA1) 的功能丧失突变会导致常染色体隐性遗传先天性鱼鳞病,
PNP
LA1 活性的改变与特应性皮炎和其他常见皮肤病的发病机制有关。为了验证
PNP
LA1 催化酰基神经酰胺和酰基酸合成的假设,我们在大肠杆菌中表达并部分纯化了可溶性截短形式的
PNP
LA1 (
PNP
LA1trun) 以及相关蛋白
PNP
LA2(ATGL,脂肪
甘油三酯脂肪酶)和共激活剂 CGI -58。将脂质体底物与
重组酶一起孵育0.5-24小时,并通过HPLC-UV和LC-MS分析产物。使用三
亚油酸酯或二
亚油酸酯底物,
PNP
LA1trun 与 ATGLtrun 一样,催化脂肪分解和酰基转移酶反应,2-30% 转化为
亚油酸、单
亚油酸酯和三
亚油酸酯。如先前报道,CGI-58 增强 ATGL 催化的脂肪分解,但 ATGL 或
PNP
LA1 并未增强转酰基酶活性。为了匹
配体内提议的活性,
PN