Fura-2 AM 是一种高亲和力的细胞内钙离子指示剂,能被紫外光激发并在紫外光下产生比率荧光。
体外研究以下是我们推荐的操作流程。此协议仅为指导性建议,请根据具体需求进行调整:
准备 Fura-2 AM 溶液:取 50 µg Fura-2 AM 粉剂加入含有 50 µL 干燥氮气包装的 DMSO 中,制备 1 mM 的 Fura-2 AM 储备液。务必使用未加水的 DMSO,并通过刺破密封膜用针头去除 DMSO 液滴以防止其水分化。将配好的溶液储存在避光干燥处。Fura-2 AM 在 DMSO 中于室温下可稳定存放 24 小时,而装在干容器中则可在 -20°C 下保存数月。
制备染料工作液:向 15 mL 离心管内加入 2 mL 细胞培养基并加热至 37°C,再加入 2 µL Fura-2 AM 储备液以获得浓度为 1 µM 的 Fura-2 AM 溶液。剧烈振摇溶液一分钟。
细胞染色:将装载有溶液的 35 mm 细胞培养皿移入含细胞的盖玻片,然后将盖玻片与细胞一起转移至上述装有 Fura-2 AM 工作液的培养皿中。
孵育:在黑暗、温度设定为 37°C 的孵育器内孵育神经元 30 分钟。精确计时孵育时间。
清洗:准备一个不含 Fura-2 AM 的 35 mm 细胞培养皿,将盖玻片从染液中取出并置于新皿中。
装载到成像室:将盖玻片安装在成像室中。