根据提供的信息,胸腺生成素-II (TP-II) 的生产方法主要包括以下步骤:
胸腺生成素-II的制备
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原料处理:使用小牛胸腺作为原料。加入0.1 mol/L NH4HCO3溶液进行提取,得到碱性蛋白液。
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去杂蛋白和浓缩:
- 将碱性蛋白液加热至70℃以去除变性的杂质蛋白。
- 进行过滤,去除沉淀物。
- 对上清液进行浓缩处理。
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层析纯化:
- 经过Sephadex G-50凝胶柱层析分离。
- 通过羟基磷石灰柱层析进一步精制,最终得到胸腺生成素-II。
胸腺合成素-III (TP-III) 的提取
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原料处理:使用新鲜牛脾作为原料。加入0.1 mol/L NH4HCO3进行匀浆提取,获得碱性可溶性蛋白。
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超过滤和浓缩:
- 将提取液经过H10×100微孔过滤器过滤。
- 过滤后将上清液进行浓缩,并加热至70℃。
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离心分离:在70℃条件下离心15分钟,保留上清液。
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纯化步骤:
- 将上清液调节pH值为5.2,加入阳离子交换树脂(浓度为50 mg/ml)搅拌后过滤。
- 再次将滤液调节pH至9.5,并加入新的阳离子交换树脂进行第二次搅拌和过滤。
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凝胶过滤与阴离子交换层析:
- 经过Sephadex G-75凝胶过滤分离活性成分。
- 使用阴离子交换树脂在NH4HCO3溶液中进行梯度洗脱,分别得到TP-III、杂蛋白和泛激素。
总结来说,这两种多肽的提取与纯化过程主要通过物理化学方法来实现,包括蛋白质层析、凝胶过滤以及阳离子和阴离子交换树脂等技术手段。最终目标是分离出特定的目标产物,并尽可能地去除其他杂质成分。