我们先前描述了人LCAT中的点突变(在残基149处为A; hE149A),与野生型酶[hLCAT; Wang等。(1997)J.Biol。
化学 272,280-286],得到具有与大鼠LCAT相似的底物特异性的人类酶。本研究的目的是探讨
氨基酸149在确定脂肪酰基底物特异性中的作用的分子基础。在第一个实验中,大鼠LCAT(r
A149E)的反向突变将大鼠LCAT的底物特异性转化为人类酶的底物特异性,证明了该突变是上下文无关的和可逆的。在第二个实验中 我们发现与hLCAT相比,hE149A对含有20个碳而不是18个碳的sn-2脂肪酰基链的PC物种具有更高的活性。hE149A活性的提高是由于表观V(max)的增加,而不是由于表观K(m)或LCAT与PC表面的结合。在hLCAT的149位上取代了不同的
氨基酸,表明只有在去除残基149上的负电荷时,才用含sn-2 20:4的PC底物激活该酶。我们得出的