摘要:
制备了以下两种荧光肽作为环 AMP 依赖性蛋白激酶反应的底物:Leu-Arg-Arg-Ala-Ser-Leu-X;1(X= 2-(丹酰氨基)乙基氨基或 DAE)和 2(X=4-甲基-2-氧代-7-色烯氨基或 MCA)。这两种肽在 ATP 和来自牛心的环磷酸腺苷依赖性蛋白激酶催化亚基的作用下按一定比例磷酸化。肽 1 的磷酸化会使 550 纳米波长处的荧光强度增加 10%。这样就可以通过荧光光谱测定肽的磷酸化。用这种方法和传统的磷纤维素纸方法得出的磷酸化动力学参数如下:1 的 Km 为 7.8 μM,Vmax 为 35 μmol-min-1-mg-1;2 的 Km 为 7.4 μM,Vmax 为 16 μmol-min-1-mg-1。