金黄色葡萄球菌分选酶 A 是一种转肽酶,已广泛用于蛋白质的位点特异性修饰,最初用于将含有 LPXTG 识别序列的标记试剂连接到具有 N 末端甘氨酸的蛋白质或肽。还报道了具有其他识别序列的分选酶突变体,但在所有情况下,转肽反应的可逆性限制了分选酶介导的标记反应的效率。对于野生型分选酶,depsipeptide 底物,其中易断裂的肽键被酯取代,允许有效地不可逆分选酶介导的标记,因为醇副产物是一种不良的竞争亲核试剂。在本文中,报道了缩肽底物用于进化分选酶变体的用途。已经研究了三种分选酶的底物特异性,允许鉴定接受 LPEToG 和 LPESoG 缩肽的正交酶对,这些酶已应用于含有第二个潜在 N 末端甘氨酸残基的模型蛋白质突变体的双 N 末端标记。该方法提供了一种有效的正交位点特异性标记技术,进一步扩展了生化蛋白质标记工具包。
Accelerated Identification of Cell Active KRAS Inhibitory Macrocyclic Peptides using Mixture Libraries and Automated Ligand Identification System (ALIS) Technology