A Cooperative <i>Escherichia coli</i> Aspartate Transcarbamoylase without Regulatory Subunits,
作者:Kimberly R. Mendes、Evan R. Kantrowitz
DOI:10.1021/bi1010333
日期:2010.9.7
nucleotide-binding regulatory dimers, r2. By introducing specific disulfide bonds linking the catalytic chains from the upper trimer site specifically to their corresponding chains in the lower trimer prior to dissociation, a new catalytic unit, c6, was isolated consisting of two catalytic trimers linked by disulfide bonds. Not only does the c6 species display enhanced enzymatic activity compared to the wild-type
在这里,我们报告了无调节亚基的协作大肠杆菌天冬氨酸氨基甲酰化酶 (ATCase)的分离、动力学表征和 X 射线结构测定。天然 ATCase 全酶由 6 条催化链组成,它们被组织成两个三聚体,由 6 个调节链非共价桥接,它们被组织成三个二聚体,c 6 r 6。天然全酶的解离产生具有催化活性的三聚体 c 3和核苷酸结合调节二聚体 r 2。通过引入特定的二硫键,在解离之前将催化链从上部三聚体位点连接到它们在下部三聚体中的相应链,一个新的催化单元,c 6, 由二硫键连接的两个催化三聚体组成。与野生型酶相比,不仅 c 6物种显示出增强的酶活性,而且二硫键还赋予同向协同性,这在野生型 c 3 中从未观察到。c 6 ATCase 在磷酸盐存在下结晶,其 X 射线结构确定为 2.10 Å 分辨率。c 6的结构与磷酸盐配体的 ATCase 以与其他 R 状态结构几乎相同的构象存在,具有相似的垂直间隔和平面角