摘要:
研究了胡萝卜聚(1→4-α-D-半乳糖醛酸)半乳糖醛酸水解酶(E.C.3.2.1.67)活性中心的尺寸和排列。分子活性 k0 和参数 k0/Km 是根据实验测定的迈克尔常数 Km 和线性寡(D-半乳糖苷酸)(聚合度 n = 2 至 7)在 pH 值为 5.0 和 30 °C 时的最大催化水解速率计算得出的。根据对数 k0 和对数 k0/Km 与 n 的关系,我们得出活性中心由六个亚位点组成,催化位点位于第一和第二亚位点之间。根据 Hiromi 的理论[Hiromi K.:Biochem. Biophys. Res. Commun. 40, 1 (1970)],动力学数据被用于计算第三个(A3)至第六个(A6)亚位点的亲和力(Ai)。研究了胡萝卜多(半乳糖醛酸)水解酶催化分子非还原端的寡(D-半乳糖醛酸)逐渐末端水解裂解的两种可能作用模式。在最佳条件(pH 值和温度)下,五(D-半乳糖苷酸)单分子水解产物的分布表明,这是一种以单碰撞为主的多链酶促作用。酶降解的动力学结果与上述假设十分吻合。