Identification of Uridine 5′-Diphosphate-Glucuronosyltransferases Responsible for the Glucuronidation of Mirabegron, a Potent and Selective β3-Adrenoceptor Agonist, in Human Liver Microsomes
摘要:
米拉贝隆通过多种机制清除,包括药物代谢酶。最主要的清除途径之一是直接葡糖醛酸化。在人类中,已鉴定出M11(O-葡糖苷酸),M13(氨基甲酰-葡糖苷酸)和M14(N-葡糖苷酸),其中M11是人类血浆中的主要代谢物之一。本研究旨在使用人肝微粒体(HLM)和重组人UGTs(rhUGTs)识别负责米拉贝隆直接葡糖醛酸化的尿苷5'-二磷酸(UDP)-葡糖醛酸基转移酶(UGT)同工酶。反应混合物包含1-1000 μM的米拉贝隆,8 mM MgCl2,白粉菌素(25 μg/mL),50 mM Tris-HCl缓冲液(pH 7.5),人肝微粒体(HLM)或rhUGT(1.0 mg蛋白/mL),以及2 mM UDP-葡萄糖醛酸,总体积为200 μL,在37 °C下反应120分钟。从16个人中使用的HLMs进行了相关性研究,并使用甲芬那酸和丙泊酚进行了抑制研究。关于M11形成,在测试的rhUGT中,rhUGT2B7表现出高活性(11.3 pmol/min/mg蛋白)。这个结果得到了个体HLM中M11形成活性和UGT2B7标记酶活性(吗啡的3-葡糖醛酸化,r 2 = 0.330,p = 0.020)之间的相关性;池化HLMs中甲芬那酸的抑制作用(IC50 = 22.8 μM);以及池化HLMs和rhUGT2B7之间的相对相似的K m值(1260 vs. 486 μM)的支持。关于M13和M14形成,在测试的rhUGT中,rhUGT1A3和rhUGT1A8分别表现出高活性。UGT2B7是HLMs中M11形成的主要催化剂。关于M13和M14形成,UGT1A3和UGT1A8分别是葡糖醛酸化的强有力候选者。