we report the application of BRET to performing a biorthogonal reaction in living cells; namely, releasing functional molecules through energy transfer to a coumarin molecule, a process termed bioluminolysis. An efficient BRET from Nanoluc-Halotag chimera protein (H-Luc) to a coumarin substrate yields the excited state of coumarin, which in turn triggers hydrolysis to uncage a target molecule. Compared
生物发光共振能量转移(BRET)已被广泛用于研究
生物系统中的动态过程,例如蛋白质-蛋白质相互作用和其他信号事件。除了充当记者,BRET还可以打开生命系统中的功能。在本文中,我们报道了BRET在活细胞中进行
生物正交反应的应用。即通过能量转移到
香豆素分子释放功能性分子,这个过程称为
生物发光。从Nanoluc-Halotag嵌合蛋白(H-Luc)到
香豆素底物的有效BRET产生了
香豆素的激发态,这又触发了
水解作用以解开靶分子。与传统方法相比,这种新颖的开盖系统不需要外部光源,并且显示出快速的动力学特性(t1 / 2 <2分钟)。