申请人:THE WORLD HEALTH ORGANISATION
公开号:WO1993003167A1
公开(公告)日:1993-02-18
(EN) A rapid and efficient method of DNA isolation, storage, and cleavage that provides DNA suitable for amplification by a sequence-specific method is provided. The method for isolating biologically active DNA from a biological sample having DNA-containing structures includes: (1) contacting a biological sample containing DNA-containing structures with a lysis and storage buffer comprising a non-amphipathic chaotropic salt sufficient to lyse DNA-containing structures in the sample and a chelating agent to preserve the DNA from degradation to form a mixture of the biological sample and the lysis and storage buffer; (2) incubating the mixture formed in step (1) with a metal-containing chemical nuclease that cleaves the DNA to DNA fragments; and (3) purifying the DNA fragments. The DNA isolated can be catenated closed circular DNA, such as kinetoplast DNA of $i(Trypanosoma cruzi). The purified DNA fragments can be used for amplification in a sequence-based DNA amplification system employing primers that hybridize to the DNA in order to determine the presence of a specific DNA sequence in the fragements. The combination of the isolation and amplification methods can be useful for the detection of parasitic, bacterial, and viral diseases by identification of DNA sequences associated with the organisms causing them.(FR) L'invention décrit un procédé rapide et efficace d'isolation, de préservation et de coupure de l'ADN pemettant d'obtenir un ADN capable d'amplification au moyen d'un procédé sequentiel spécifique. Le procédé d'isolation d'un ADN biologiquement actif à partir d'un spécimen biologique possédant des structures contenant l'ADN comprend: (1) la mise en contact d'un spécimen biologique possédant des structures contenant de l'ADN avec une lyse et un tampon de réserve contenant un sel chaotropique non amphipathique suffisant pour effectuer la lyse des structures contenant de l'ADN dudit spécimen, ainsi qu'un agent chélatant servant à préserver l'ADN de la dégradation, afin de constituer un mélange du spécimen biologique, de la lyse et du tampon de réserve; (2) l'incubation du mélange constitué dans l'étape 1) avec une nucléase chimique à teneur métallique coupant l'ADN en fragments d'ADN; (3) la purification desdits fragments d'ADN. L'ADN isolé peut être un ADN circulaire fermé caténarisé, tel qu'un ADN kinétoplaste de $i(Trypanosoma cruzi). On peut utiliser les fragments d'ADN purifiés dans le but d'une amplification dans un système d'amplification d'ADN séquentiel utilisant des amorces s'hybridant à l'ADN, afin de déterminer la présence d'une séquence d'ADN spécifique dans les fragments. La combinaison des méthodes d'isolation et d'amplification peut être efficace pour la détection de maladies parasitaires, bactériennes et virales au moyen de l'identification des séquences d'ADN associées aux organismes qui les provoquent.