摘要:
来自科宁木霉 G-39 的 aL-阿拉伯呋喃糖苷酶 (Abf) 基因在毕赤酵母中成功表达。通过阳离子交换色谱法将重组酶纯化至> 90%同质性。纯化的酶以对硝基苯基-α-L-阿拉伯呋喃糖苷 (pNPAF) 和 2,4-二硝基苯基-β-D-木糖苷 (2,4-DNPX) 作为底物,同时具有 aL-阿拉伯呋喃糖苷酶和 β-D-木糖苷酶 (Xyl) 活性, 分别。表征了双功能酶的稳定性和催化特性。当测定 Abf 和 Xyl 活性时,该酶在室温下在 2 和 8.3 之间的 pH 值下稳定至少 2 小时。当 pH 值超过 9.5 或降至 1.5 以下时,酶活性急剧下降。该酶在 55°C 孵育 2 小时后失去 35% 的 Abf 活性,但保留了 95% 的 Xyl 活性,其中 2, 以4-DNXP为底物,条件相同。通过酶活性的抑制研究对两种酶功能的活性位点拓扑结构进行了进一步研究。结果表明,甲基-α-L-阿拉伯呋喃糖苷抑制对作为底物的