Improved Performance of Positive-Ion Mode Free Radical-Initiated Peptide Sequencing with <i>p</i>-TEMPO-Bz
作者:Kemi E. Osho、Kimberly A. Wasik、Laina M. Geary、Nicholas B. Borotto
DOI:10.1021/jasms.2c00306
日期:——
applied to multiply charged derivatized peptide ions, a series of high-abundance mass losses are observed which siphon ion abundance from radically generated sequence ions. This loss of ion abundance reduces the sequence coverage generated by FRIPS fragmentation. In this work, we hypothesized that these mass losses were assisted by the ortho-orientation of the radical precursor undergoing facile conversion
自由基引发的肽测序 (FRIPS) 是一种串联质谱技术,可通过碰撞引发的自由基化学生成序列信息离子。碰撞激活均裂裂解安装的自由基前体并启动自由基形成、广泛的氢原子转移和肽主链解离。虽然 FRIPS 技术显示出巨大的前景,但当应用于多电荷衍生化肽离子时,观察到一系列高丰度质量损失,这些损失从自由基产生的序列离子中虹吸离子丰度。这种离子丰度的损失降低了 FRIPS 碎片产生的序列覆盖率。在这项工作中,我们假设这些质量损失是由ortho- 自由基前体的取向很容易转化为五元或六元中间体或产物,并且当与对位前体的较低键解离能结合时,共轭肽不会发生这种化学反应。为了验证这一论断,我们合成了p -TEMPO-Bz,将其与这些肽缀合,并碰撞激活每个肽。事实上,我们看到这些不需要的碰撞过程急剧减弱,自由基前体离子丰度显着增加。离子丰度的增加导致生成的序列覆盖率显着增加。这些结果表明p-TEMPO-Bz 显着提高了正离子模式