PPO activation and PO catalysis have been elusive. RESULTS Herein, we report the crystal structure of PPO8 from A. gambiae at 2.6 Å resolution. PPO8 forms a homodimer with each subunit displaying a classical type III di-copper active center. Our molecular docking and mutagenesis studies revealed a new substrate-binding site with Glu364 as the catalytic residue responsible for the deprotonation of mono-
                                    背景技术
酚氧化酶(PO)催化的
黑色素化是昆虫针对病原性和寄生虫感染的普遍防御机制。在诸如冈比亚按蚊(Anopheles gambiae)之类的蚊子中,
黑色素囊化作用是对某些引起疟疾和丝虫病的寄生虫的抵抗机制。PO最初是由血细胞合成的,并以无活性的
酚氧化酶(
PPO)的形式释放到血淋巴中,在识别外来入侵者时被
丝氨酸蛋白酶级联激活。
PPO活化和PO催化的机理一直难以捉摸。结果在此,我们报道了来自冈比亚按蚊的
PPO8的晶体结构,分辨率为2.6。
PPO8形成同型二聚体,每个亚基均显示出经典的III型双
铜活性中心。我们的分子对接和诱变研究揭示了一个新的底物结合位点,其中Glu364作为负责单
酚和双
酚底物去质子化的催化残基。Glu364的突变严重损害了Ag
PPO8的单
酚羟化酶和双
酚氧化酶的活性。我们的数据表明,新发现的底物结合口袋是催化的实际位点,并且可以实现
PPO活化而无需撤出之前被视为底物“占位符”