(4-nitrophenyl)methyl (4R,5S,6S)-6-[(1R)-1-hydroxyethyl]-4-methyl-7-oxo-3,4-diphenoxy-5-phosphonooxy-1-azabicyclo[3.2.0]hept-2-ene-2-carboxylate | 39450-01-6

• 物质功能分类: 生物化工 - 酶及辅酶类
• 分子结构分类: 有机化合物 - 有机杂环化合物 - 内酰胺类
• 英文名称: (4-nitrophenyl)methyl (4R,5S,6S)-6-[(1R)-1-hydroxyethyl]-4-methyl-7-oxo-3,4-diphenoxy-5-phosphonooxy-1-azabicyclo[3.2.0]hept-2-ene-2-carboxylate
• CAS: 39450-01-6
• 化学式: C29H27N2O12P
• 分子量: 626.5
• InChiKey: OUPAKHMWUJJXOM-ANOMEZDXSA-N

物化性质

• 溶解度：
  H2O：10 mg/mL，微浑浊，棕黄色

计算性质

• 辛醇/水分配系数(LogP)：
  2.5
• 重原子数：
  44
• 可旋转键数：
  11
• 环数：
  5.0
• sp3杂化的碳原子比例：
  0.24
• 拓扑面积：
  198
• 氢给体数：
  3
• 氢受体数：
  12

安全信息

• 危险品标志：
  Xn
• 安全说明：
  S22,S23,S24,S26,S36/37,S45
• 危险类别码：
  R36/37/38,R42
• WGK Germany：
  1
• 海关编码：
  35079090

制备方法与用途

简介

蛋白酶K是从白色念珠菌分离出的一种强力蛋白溶解酶，具有很高的比活性，是DNA提取的关键试剂。该酶在pH4至12.5的广泛范围内及50至70°C的高温下均有活性，适用于质粒或基因组DNA、RNA的分离。

性质

蛋白酶K因其能消化天然角蛋白（keratin）而得名“蛋白酶K”。它的主要切割位点是脂肪族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽键。由于其广泛的切割能力，在实验室中非常常用。蛋白酶K属于丝氨酸蛋白酶SB超家族中的S8家族（枯草杆菌蛋白酶也属此超家族），分子量为28.9千道尔顿。

酶活性

蛋白酶K的酶活力大于30U/mg。在37℃下，以血红蛋白为底物时，1分钟内可以产生相当于1微摩尔酪氨酸Folin阳性的氨基酸或多肽的量定义为一个单位的蛋白酶K酶活力。其在较宽的pH范围内有效，有效的pH范围为4.0至12.5，最佳pH范围为7.5至8.0。蛋白酶K的最佳反应温度为65℃，但在65℃或更高温度下会迅速降解。通常选择50-55℃作为反应温度。

应用

蛋白酶K常应用于分子生物学领域，在制备核酸时，它可以去除杂蛋白，并迅速使核酸酶失活，防止其降解目标产物DNA和RNA。此外，蛋白酶K在变性剂存在下仍能保持活性（如SDS、尿素、EDTA等），与其他蛋白酶（如胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶）不同。

用途

蛋白酶K因其能够消化角蛋白（kratin）而得名“蛋白酶K”。该家族包括各种由真菌、酵母及革兰氏阴性细菌分泌的细胞内肽酶，其中细菌分泌的酶有高度序列相似性（>55%）。林伯氏白色念珠菌（Tritirachium album Limber）分泌产生的蛋白酶K是这一家族的模式蛋白。蛋白酶K对大多数底物均有切割活性，但偏好于带有脂肪族及芳香烃的肽链。

其属于丝氨酸蛋白酶，拥有典型的丝氨酸活性位点：Asp39–His69–SEr224 。含有一个单练肽链包含277个氨基酸位点，并具有两个二硫键、一个空置的半胱氨酸位点以及两个钙离子结合位点。

蛋白酶K的应用主要为核酸提取时去除DNA酶和RNA酶，还可将结合于基因组上的组蛋白去除，并用于碱性磷酸酶的失活。目前分子生物学技术已应用于许多检测标准中，如转基因检测、动物属性检测、致病微生物检测等。在分子生物学检测中，核酸提取的质量直接影响了后续PCR反应的扩增效率。许多标准在核酸提取步骤中都设立了添加蛋白酶K消化的步骤，以期提取较纯的核酸。

为了保护核酸，在分子生物学核酸提取实验中通常含有EDTA等试剂，由于EDTA可以与金属离子络合，因此可能会影响酶活性；并且通常在pH8.0和55℃条件下进行消化，不同pH值和温度条件会使得酶活性受到影响。

此外，蛋白酶K还用于分离DNA和RNA期间使核苷酸酶蛋白失活、去除内毒素对阳离子蛋白的约束（如溶菌酶和核糖核酸酶）、研究中分离肝、酵母、绿豆线粒体、测定细胞膜上的酶、抗体标记、石蜡包埋组织切片中的抗原结合位点暴露以及消化脑组织样本中的蛋白质，用于朊病毒传染性海绵状脑病（TSE）的研究。