摘要:
对于不含半胱氨酸残基的蛋白质,可以通过使用定点诱变在感兴趣的位点引入半胱氨酸残基,然后进行半胱氨酸特异性化学修饰以掺入荧光探针来完成定点荧光标记。2 然而,对于含有半胱氨酸残基的蛋白质(大多数蛋白质的分子量 > 50 kDa),位点特异性荧光标记是困难的。已经报道了三种策略:(i)内含肽介导的标记(“表达蛋白连接”),3(ii)氧化介导的标记,4和(iii)三价砷介导的标记。5 前两种策略仅限于标记蛋白质末端,不允许原位标记(即,直接标记比色皿、凝胶、印迹或生物样品中的蛋白质,无需后续纯化步骤);第三种策略目前仅限于单一荧光染料。在这里,我们报告了一种策略,允许标记末端或内部站点,允许原位标记,并且与具有不同光谱和光物理特性的一系列荧光染料兼容。我们的策略涉及使用“六组氨酸标签”6,7,8s,即氨基酸序列 His 6s 来靶向位点特异性荧光标记。已知六组氨酸标签与过渡金属络合物紧密相互作用,包括