摘要:
理性分析低分子量极性代谢物的质谱(MS)分析可能具有挑战性,因为异构体的色谱分离度差且电离效率不足。这些代谢物包括关键代谢途径(如糖酵解,磷酸戊糖途径和克雷布斯循环)的中间体。因此,对生物流体或细胞培养模型中这些代谢物的敏感,特异和全面的定量分析,可以洞察扰动的新陈代谢起作用的多种疾病状态。方法建立了离子对反相超高效液相色谱(IP-RP-UHPLC)/ MS方法,以分离和分析与生化相关的含磷酸盐和羧酸的代谢物。二异丙基乙胺(DIPEA)用作IP试剂,结合反相液相色谱(RP-LC)和三重四极杆质谱仪,使用选定的反应监测(SRM)和负电喷雾电离(NESI)。以前已使用附加试剂六氟异丙醇(HFIP)来提高通过UHPLC / MS进行核苷酸分析的灵敏度,以提高灵敏度。结果当与IP碱一起添加时,HFIP与乙酸相比,对某些分析物(包括1,6-6-磷酸二氢果糖,磷酸烯醇丙酮酸和6-磷酸葡萄糖酸)的IP-RP-UHPLC