摘要:
将含荧光基团的非天然氨基酸衍生物掺入蛋白质中是一种有用的蛋白质分析方法。在此,我们研究了在UAG起始密码子的响应下,将荧光标记的非α-氨基酸羧酸掺入蛋白质N末端的过程。合成了一系列TAMRA标记的氨基酸羧酸,并将其连接到由大肠杆菌起始tRNA衍生的琥珀抑制起始tRNA上。通过向大肠杆菌无细胞翻译系统中添加TAMRA酰化的起始tRNA,成功地将荧光标记的氨基酸羧酸掺入链霉亲和素的N末端,尽管掺入效率因氨基酸羧酸链长而异。基于这一观察,设计并合成了使用BODIPY、罗丹明和花菁荧光染料标记的3-氨基丙酸衍生物。使用BODIPY和罗丹明染料开发的荧光标记3-氨基丙酸衍生物可以高效掺入。另一方面,当使用花菁染料标记时,6-氨基己酸可以有效掺入。本研究表明,翻译起始可以接受各种非天然底物,并提供了一种有用的方法,用于使用各种荧光团对蛋白质N末端进行特异性标记。