DNA double-strand break repair in cell-free extracts from Ku80-deficient cells: implications for Ku serving as an alignment factor in non-homologous DNA end joining
摘要:
非同源 DNA 末端连接 (NHEJ) 被认为是哺乳动物细胞中双链断裂 (DSB) 修复的主要途径,并且取决于 DNA 末端结合 Ku70/80 异二聚体等。为了研究 Ku 在 NHEJ 中的功能,我们比较了野生型 CHO-K1 细胞、Ku80 缺陷型 xrs6 细胞和 Ku80-cDNA 互补的 xrs6 细胞 (xrs6-Ku80) 的无细胞提取物重新加入不同类型的细胞的能力。 DSB 体外。虽然两种 Ku80 丰富的提取物在重新连接所有类型的 DNA 末端时非常高效且准确,但 xrs6 提取物却显示出 NHEJ 效率和准确度大幅下降。在包含与 5' 突出端或平端相连的 3' 突出端的非同源末端构型中,准确性的缺乏最为明显。虽然 3'-突出端的序列大部分通过填充 DNA 合成在 Ku80 熟练的提取物中得以保留,但它们在 xrs6 提取物中总是完全丢失,因此,相反,在其断点处出现显示微同源补丁的小缺失。总之,我们的结果与 Ku 缺陷酵母菌株的先前结果一致,表明 Ku 可能作为比对因子,不仅提高 NHEJ 效率,而且提高准确性。此外,在缺乏 Ku 的情况下存在二级 NHEJ 活性,这很容易出错,并且可能通过碱基配对相互作用来辅助。