Beschrieben wird ein Verfahren zum Nachweis von 5-Methylcytosin in genomischen DNA-Proben. Zuerst wird eine genomische DNA aus einer DNA-Probe mit einem Reagenz chemisch umgesetzt, wobei 5-Methylcytosin und Cytosin unterschiedlich reagieren. Anschließend wird die vorbehandelte DNA unter Verwendung einer Polymerase mit Primern unterschiedlicher Sequenz amplifiziert. Im nächsten Schritt wird die amplifizierte genomische DNA auf einen Oligonukleotid Array hybridisiert und PCR-Produkte erhalten, die mit einer Markierung versehen sein müssen. Alternativ können die PCR-Produkte in einer Primer Extention Reaktion verlängert werden, wobei auch die Verlängerungsprodukte mit einer Markierung versehen sind.
Im letzten Schritt werden die verlängerten Oligonukleotide auf das Vorhandensein der Markierung untersucht.
本文介绍了一种检测基因组 DNA 样品中 5-甲基胞嘧啶的方法。首先,用一种试剂对 DNA 样品中的基因组 DNA 进行化学反应,5-甲基胞嘧啶和胞嘧啶会发生不同的反应。然后,使用带有不同序列引物的聚合酶对经过预处理的 DNA 进行扩增。下一步,将扩增的基因组 DNA 与寡核苷酸阵列杂交,得到必须标记的 PCR 产物。另外,PCR 产物还可以在引物延伸反应中进行延伸,延伸产物也会被标记。
最后一步是分析延伸的寡核苷酸是否含有标签。
Method for detecting cytosine methylations
申请人:——
公开号:US20040152080A1
公开(公告)日:2004-08-05
A method is described for the detection of 5-methylcytosine in genomic DNA samples. First, a genomic DNA from a DNA sample is chemically converted with a reagent, whereby 5-methylcytosine and cytosine react differently. Then the pretreated DNA is amplified with the use of a polymerase with primers of different sequence. In the next step, the amplified genomic DNA is hybridized to an oligonucleotide array and PCR products are obtained, which must be provided with a label. Alternatively, the PCR products can be extended in a primer extension reaction, wherein the extension products are also provided with a label.
In the last step, the extended oligonucleotides are investigated for the, presence of the label.
本文介绍了一种检测基因组 DNA 样品中 5-甲基胞嘧啶的方法。首先,用一种试剂对 DNA 样品中的基因组 DNA 进行化学转化,使 5-甲基胞嘧啶和胞嘧啶发生不同的反应。然后,使用聚合酶和不同序列的引物对经过预处理的 DNA 进行扩增。下一步,将扩增的基因组 DNA 与寡核苷酸阵列杂交,得到 PCR 产物,这些产物必须带有标记。另外,还可以在引物延伸反应中对 PCR 产物进行延伸,延伸产物也带有标记。
最后一步,对扩展后的寡核苷酸进行检测,以确定是否存在标签。
VERFAHREN ZUM NACHWEIS VON CYTOSIN-METHYLIERUNGEN
申请人:Epigenomics AG
公开号:EP1294945B1
公开(公告)日:2006-08-30
PROCESS FOR THE DETECTION OF CYTOSINE METHYLATIONS
申请人:Peist Ralf
公开号:US20100297614A1
公开(公告)日:2010-11-25
The invention concerns a method for the detection of cytosine methylations in DNA and a kit for undertaking an assay according to the method of the invention.