摘要:
由于存储期间的各种修饰,治疗性抗体通常会遭受降解。我们检测到在40°C下存储6个月的免疫球蛋白gamma 1(IgG1)的降解,并通过胰蛋白酶肽图谱和串联质谱法鉴定出该修饰为重链铰链序列S 219 CDKTHT 225中Cys220的消旋。通过在50°C和pH 9.0下温育蛋白质,可故意提高Cys220的外消旋速率,而所有其他半胱氨酸残基均不受影响。Cys220的消旋作用已通过质谱法和被迫在D 2 O中降解的IgG1胰蛋白酶消化物的提取离子色谱法以及一系列含有d的合成铰链片段的结合进行了确认。-氨基酸,以及酸水解物中d-半胱氨酸的检测。为了使Cys220的外消旋作用与Asp221相邻残基的异肽形成之间可能的关系合理化,我们提出了一种新的反应机理,该机理假定碱性催化剂通过激活Lys222的酰胺氮来引发这些反应。由于铰链区的高度柔性性质,Lys222可以参与环状咪唑啉中间体的形成,该中间体涉及