5-氨基乙酰丙酸合酶 (A
LAS) 和 8-
氨基-
7-氧代壬酸合酶 (AONS) 是 5'-
磷酸吡哆醛 (PLP) 依赖性酶的 α-氧代胺合酶家族的同型二聚体成员。以前,将两个 A
LAS 亚基连接成单个
多肽链二聚体产生的酶 (A
LAS/A
LAS) 的转换数明显高于野生型 A
LAS。为了检查每个活性位点对 A
LAS/A
LAS 酶活性的贡献,催化性赖
氨酸也与 PLP 辅因子共价结合,在活性位点之一被丙
氨酸取代。尽管 A
LAS/A
LAS 的两个活性位点中 A
LA 形成前稳态爆发的
化学速率相同,但变体的 k(cat) 值显着不同(4.4±0.2 对 21.6±0.7 分钟(-1 )) 取决于两个活性位点中的哪一个含有突变。我们提出 A
LAS/A
LAS 活性位点的功能不对称源于连接酶亚基和引入的分子间菌株改变了蛋白质构象灵活性和产物释放速率。此外,活性位点功能不对称扩展到嵌合 A
LAS/AONS 蛋