本文描述了一种基于可应用于各种小分子激酶的比率荧光探针的实时激酶测定方法。该探针可以通过比例荧光变化来追踪
ATP和
ADP的可逆交换,这是大多数小分子激酶反应中的常见现象。这种特性有助于监测小分子激酶中的
磷酸化和去
磷酸化,而现有的大多数方法都集中在其中一种反应上。为了证明该方法在小分子激酶测定中的适用性,分析了分别使底物
磷酸化和去
磷酸化的
己糖激酶和
肌酸激酶。比率荧光变化与酶活性和众所周知的
抑制剂的抑制效率相关,N-苯甲酰基-d-
葡糖胺和
碘乙酰胺也进行了监测。值得注意的是,荧光的变化可以通过肉眼用简单的光源观察到。