摘要:
我们最近开发了新的 NMR 方法,用于监测蛋白质中酪氨酸羟基 (Tyr-OH) 和半胱氨酸巯基 (Cys-SH) 基团的氢交换率。这些方法有助于鉴定蛋白质中缓慢交换的极性侧链质子,这些质子是蛋白质结构改进的 NOE 限制的来源。在这里,我们扩展了监测 18.2 kDa 蛋白质 EPPIb 中丝氨酸 (Ser) 和苏氨酸 (Thr) 残基的 OH 基团的氢交换率的方法,从而证明了 NOE 限制与缓慢交换 OH 质子的有用性细化蛋白质结构。对于含有 Ser 的蛋白质,通过监测 H(2)O/D(2)O (1:1) 混合物中的 (13)C(β)-NMR 信号,可以很容易地识别出缓慢交换的 Ser/Thr-OH 基团/Thr 残基与 (13)C,(2) H-双标记在其 β 碳上。在这种情况下,质子化和氘化同位素之间的 OH 基团处于平衡状态,当它们的交换速率慢于同位素位移效应的时间尺度时,这两种物质的