迄今为止,利用微
生物转谷
氨酰胺酶(
MTG)产生位点特异性
抗体-药物偶联物(ADC)的研究重点在于
抗体中工程改造的酰基供体谷
氨酰胺残基的转酰胺基化,其假设是
MTG对酰基受体赖
氨酸的特异性较低可能导致多个天然赖
氨酸残基的转酰胺基化,从而产生异质产物。我们调查了天然IgG赖
氨酸作为基于谷
氨酰胺的酰基供体底物的酰基受体位点的利用。在多种
重组IgG单克隆
抗体(mAb)中大约80个赖
氨酸中,没有一个被转酰胺基化。由于
重组单克隆
抗体由于在生产细胞宿主中被
羧肽酶B裂解而缺乏C端Lys447,我们探讨了通过添加C末端
氨基酸来阻断Lys447的裂解是否会导致各种酰基供体底物对Lys447的转酰胺基作用。在位置448处存在任何非酸性,非脯
氨酸
氨基酸残基的情况下,
MTG有效地转酰胺化了Lys447。整个
抗体中的赖
氨酸扫描诱变进一步揭示了重链和轻链恒定区中的多个转酰胺基位。另外,对Fab'片段中的铰链区的诱变的扫描