[DE] GEREINIGTE SACCHAROSE-SYNTHASE, VERFAHREN ZUR HERSTELLUNG DERSELBEN UND DEREN VERWENDUNG<br/>[EN] PURIFIED SACCHAROSE SYNTHASE, PROCESS FOR ITS PRODUCTION AND ITS USE<br/>[FR] SACCHAROSE-SYNTHASE PURIFIEE, PROCEDE DE FABRICATION ET UTILISATION
申请人:FORSCHUNGSZENTRUM JÜLICH GMBH
公开号:WO1994001540A1
公开(公告)日:1994-01-20
(DE) Die enzymatische Gewinnung von Nucleotidzuckern, insbesondere von UDP-, ADP-, CDP- oder TDP-Saccharose, durch Umsetzung von Nucleosiddisphosphaten mit Di- oder Trisacchariden kann mit einer Saccharose-Synthase erreicht werden, bei der durch besondere Reinigungsmethoden und empfindlichen Nachweis die weitgehende Abwesenheit von Nucleosidphosphatasen (« 0,1 %) sichergestellt ist. Die Reinigung des bevorzugt aus Reiskörnern erhaltenen Rohextrakts umfaßt insbesondere die Aufgabe des ultrafiltrierten, 50 mM KCl aufweisenden Extrakts von pH 8 auf eine Sepharose-Q-Säule und eine Gradienten-Elution aus der Säule bei pH 8 mit 50 - 500 mM KCl.(EN) Nucleotide sugars, especially UDP, ADP, CDP or TDP saccharoses can be enzymatically obtained by the reaction of nucleoside diphosphates with di or trisaccharides with a saccharose synthase in which the virtual absence of nucleoside phosphatases (0.1 % or less) can be ensured by special purification methods and sensitive detection. The purification of the raw extract, obtained preferably from rice grains, comprises especially the application of the ultra-filtered extract containing 50 mM KCl with a pH 8 on a sepharose Q column and a gradient elution out of the column at a pH 8 with 50 to 500 mM KCl.(FR) Il est possible de produire par voie enzymatique des sucres nucléotides, notamment de la saccharose UDP, ADP, CDP ou TDP, en faisant réagir des diphosphates nucléosides avec des di- ou des trisaccharides, avec une saccharose-synthase. Des méthodes particulières de purification et une identification sensible permettent de garantir l'absence de phosphates nucléosides (« 0,1 %). La purification de l'extrait brut obtenu de préférence à partir de grains de riz implique notamment de procéder à l'application de l'extrait ultrafiltré comportant 50 mM de KCl ayant un pH 8 sur une colonne de sépharose Q et à une élution par gradients en sortie de la colonne à un pH 8 avec 50 à 500 mM de KCl.
通过酶解法生产核苷苷糖,特别是UDP、ADP、CDP或TDP核苷糖,可以通过将核苷二磷酸酯与二糖或三糖反应,使用糖合酶进行。这种糖合酶通过特别的分离方法和敏感检测,可以确保核苷二磷酸酯(“0.1%或更低”残留)的极低水平残留。从水稻种子中获得的原材料提取物的纯化过程,特别是超滤提取物(含50 mM KCl,pH 8)在Sepharose Q柱上进行表面处理,然后通过pH 8至50至500 mM KCl的梯度色谱在柱上出柱。