摘要:
假单胞菌 从对应的外消旋的5-取代的乙内酰脲不对称地产生L-氨基酸的NS671菌株具有172kb的质粒。固化实验表明,命名为pHN671的该质粒负责通过菌株NS671将5取代的乙内酰脲转换为相应的L-氨基酸。通过使用pUC18作为克隆载体,从pHN671在大肠杆菌中克隆了包含与该转化有关的基因的DNA片段。最小的重组质粒,称为pHPB12,含有7.5-kb插入DNA。确定了插入DNA的核苷酸序列,发现了三个紧密间隔的开放阅读框,这些阅读框预计将编码分子量为75.6、64.9和45.7 kDa的肽。这些开放阅读框分别称为hyuA,hyuB和hyuC。通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析了携带pHPB12缺失衍生物的大肠杆菌细胞提取物,并鉴定了hyuA,hyuB和hyuC的基因产物。还用缺失衍生物检查了这些基因产物的功能。结果表明hyuA和hyuB都分别参与D-和L-5-取代的乙内酰脲向