用两种
染料标记的
三磷酸腺苷(
ATP)类似物适合进行福斯特共振能量转移(FRET),具有成为继续研究消耗
ATP的酶的酶活性的有价值的工具的潜力。在这里,我们提出了一种合成策略,可以直接获得这些
ATP类似物。较早的研究表明,在O处修饰
ATP2'和γ位置是设计这些探针的非常有前途的起点。我们合成了探针,该探针用附着在这些位置的五种不同的
染料组合修饰,并研究了未切割状态以及酶
水解后的荧光特性。所有提供的探针在切割后都会大大改变其荧光特性。它们包括比例FRET探针以及暗淬灭的类似物。对于典型的体外应用,磺化聚次甲基
染料Sulfo-Cy3和Sulfo-Cy5的组合似乎是最有前途的,因为它们在
水性缓冲液中的出色溶解性和裂解后的荧光特性发生了很大的变化。对于这种
染料组合,我们还合成了在γ-和C处修饰的类似物分别是2或O 3'位置,因为这些连接位点也被某些消耗
ATP的酶很好地接受。这些类似物显示出相当大的荧