[EN] METHOD AND APPARATUS FOR AUTOMATED CARBOHYDRATE MAPPING AND SEQUENCING<br/>[FR] PROCEDE ET DISPOSITIF AUTOMATISES DE CARTOGRAPHIE ET DE SEQUENÇAGE DES GLUCIDES
申请人:PERKIN-ELMER CORPORATION
公开号:WO1995033989A1
公开(公告)日:1995-12-14
(EN) Methods and apparatus are disclosed for improved mapping and sequencing of carbohydrate polymers. In one aspect, the improvement includes a means for coupling two capillary electrophoresis (CE) tubes in such a way so as to (i) efficiently transfer a selected sample component from a first CE capillary to a second CE capillary or, (ii) introduce a supplementary reagent into the separation path between the two capillaries, e.g., an internal standard, binding agent, enzyme, and the like. In an additional aspect, the invention includes improved apparatus and methods for electrophoresis of labeled carbohydrates in which a sample carbohydrate labeled with a first label is separated by CE and its migration behavior is compared with an internal standard labeled with one or more second labels which are distinguishable from the first label. In yet another aspect, the invention includes improved method and apparatus for sequencing carbohydrates in which a sample mixture is separated in a first CE dimension, a component of the sample mixture is selected, the selected component is incubated with an enzyme reagent, the reaction products are separated in a second CE dimension, the electrophoretic behavior of the reaction products is correlated with the known specificity of the enzyme reagent, and the process is repeated to determine the complete sequence of the carbohydrate sample.(FR) La présente invention concerne une amélioration de la cartographie et du séquençage des polymères glucidiques. L'amélioration consiste d'abord à intégrer un dispositif couplant 2 capillaires d'électrophorèse (CE) pour (i) transférer facilement d'un 1er capillaire (CE) à un 2ème capillaire (CE) un composant sélectionné dans un échantillon, ou (ii) introduire dans le canal séparant les 2 capillaires un réactif supplémentaire, par exemple, notamment un enzyme standard interne intervenant comme liant. L'amélioration consiste ensuite à intégrer un dispositif et des procédés plus évolués d'électrophorèse de glucides étiquetés, tels qu'un échantillon de glucide comportant une étiquette d'un 1er ordre est séparé par un capillaire d'électrophorèse (CE), et que le comportement migratoire de cet échantillon est comparé avec une substance interne standard comportant au moins une étiquette d'un 2ème ordre se distinguant de l'étiquette du 1er ordre. L'invention consiste enfin à intégrer un dispositif et des procédés évolués de séquençage des glucides comportant notamment plusieurs opérations: séparation d'un mélange échantillon en une 1ère dimension de capillaire d'électrophorèse (CE), sélection d'un composant du mélange échantillon, incubation du composant sélectionné avec l'enzyme réactif, séparation des produits de réaction en une 2ème dimension de capillaire d'électrophorèse (CE), comparaison du comportement à l'électrophorèse des produits de réaction par rapport à des caractéristiques connues de l'enzyme réactif, répétition de ce procédé jusqu'à déterminer la séquence complète de l'échantillon du glucide.