3-hydroxy-7-ethoxycoumarin | 95633-01-5

• 分子结构分类: 有机化合物 - 苯丙烷和聚酮 - 香豆素及其衍生物
• 英文名称: 3-hydroxy-7-ethoxycoumarin
• 英文别名: 7-ethoxy-3-hydroxycoumarin；7-Ethoxy-3-hydroxy-2H-1-benzopyran-2-one；7-ethoxy-3-hydroxychromen-2-one
• CAS: 95633-01-5
• 化学式: C₁₁H₁₀O₄
• 分子量: 206.198
• InChiKey: JGODMDQMIHNTOG-UHFFFAOYSA-N

计算性质

• 辛醇/水分配系数(LogP)：
  2.1
• 重原子数：
  15
• 可旋转键数：
  2
• 环数：
  2.0
• sp3杂化的碳原子比例：
  0.18
• 拓扑面积：
  55.8
• 氢给体数：
  1
• 氢受体数：
  4

反应信息

• 作为产物：
  描述：

  7-乙氧基香豆素 在 human cytochrome P₄₅₀ BM₃ F₁₆₂I/K₁₈₇E/M₂₃₇I mutant 、 还原型辅酶II(NADPH)四钠盐 作用下， 生成 7-羟基香豆素 、 3-hydroxy-7-ethoxycoumarin
  参考文献：
  名称：

  Engineering Bacterial Cytochrome P450 (P450) BM3 into a Prototype with Human P450 Enzyme Activity Using Indigo Formation

  摘要：

  人类细胞色素 P450（P450）酶可代谢多种内源性和异生物化合物，包括类固醇、药物和环境化学品。在本研究中，我们研究了具有吲哚氧化活性的细菌 P450 BM3（CYP102A1）突变体具有人类 P450 酶催化活性的可能性。对野生型基因的血红素结构域编码区进行易错聚合酶链反应，生成 CYP102A1 DNA 文库。该文库被转化到大肠杆菌中，用于表达 P450 突变体。突变体的初筛采用比色菌落法。在全细胞水平测量 P450 活性时，一些蓝色菌落（而非白色菌落）对香豆素和 7- 乙氧基香豆素具有明显的氧化活性，而香豆素和 7- 乙氧基香豆素是典型的人类 P450 底物，会产生荧光产物。香豆素被 CYP102A1 突变体氧化后会产生两种代谢物，即 7-羟基香豆素和 3-羟基香豆素。此外，7-乙氧基香豆素会同时通过 O-脱乙基反应氧化成 7-羟基香豆素，并通过 3-羟基反应氧化成 3-羟基、7-乙氧基香豆素。高活性突变体还能代谢其他几种人类 P450 底物，包括苯乙酮、乙氧基瑞舒芬和氯唑沙宗。这些结果表明，靛蓝的形成提供了一种简单的检测方法，可用于鉴定具有更大人类 P450 活性潜力的 CYP102A1 突变体。此外，我们的计算结果表明，结合位点的稳定性与 CYP102A1 突变体对香豆素的催化效率之间存在相关性：结合位点的结构越稳定，能量障碍越低，催化效率越高。

  DOI：

  10.1124/dmd.109.030759

文献信息

• Engineering Bacterial Cytochrome P450 (P450) BM3 into a Prototype with Human P450 Enzyme Activity Using Indigo Formation
  作者：Sun-Ha Park、Dong-Hyun Kim、Dooil Kim、Dae-Hwan Kim、Heung-Chae Jung、Jae-Gu Pan、Taeho Ahn、Donghak Kim、Chul-Ho Yun

  DOI：10.1124/dmd.109.030759

  日期：2010.5

  Human cytochrome P450 (P450) enzymes metabolize a variety of endogenous and xenobiotic compounds, including steroids, drugs, and environmental chemicals. In this study, we examine the possibility that bacterial P450 BM3 (CYP102A1) mutants with indole oxidation activity have the catalytic activities of human P450 enzymes. Error-prone polymerase chain reaction was carried out on the heme domain-coding region of the wild-type gene to generate a CYP102A1 DNA library. The library was transformed into Escherichia coli for expression of the P450 mutants. A colorimetric colony-based method was adopted for primary screening of the mutants. When the P450 activities were measured at the whole-cell level, some of the blue colonies, but not the white colonies, possessed apparent oxidation activity toward coumarin and 7-ethoxycoumarin, which are typical human P450 substrates that produce fluorescent products. Coumarin is oxidized by the CYP102A1 mutants to produce two metabolites, 7-hydroxycoumarin and 3-hydroxycoumarin. In addition, 7-ethoxycoumarin is simultaneously oxidized to 7-hydroxycoumarin by O -deethylation reaction and to 3-hydroxy,7-ethoxycoumarin by 3-hydroxylation reactions. Highly active mutants are also able to metabolize several other human P450 substrates, including phenacetin, ethoxyresorufin, and chlorzoxazone. These results indicate that indigo formation provides a simple assay for identifying CYP102A1 mutants with a greater potential for human P450 activity. Furthermore, our computational findings suggest a correlation between the stabilization of the binding site and the catalytic efficiency of CYP102A1 mutants toward coumarin: the more stable the structure in the binding site, the lower the energy barrier and the higher the catalytic efficiency.

  人类细胞色素 P450（P450）酶可代谢多种内源性和异生物化合物，包括类固醇、药物和环境化学品。在本研究中，我们研究了具有吲哚氧化活性的细菌 P450 BM3（CYP102A1）突变体具有人类 P450 酶催化活性的可能性。对野生型基因的血红素结构域编码区进行易错聚合酶链反应，生成 CYP102A1 DNA 文库。该文库被转化到大肠杆菌中，用于表达 P450 突变体。突变体的初筛采用比色菌落法。在全细胞水平测量 P450 活性时，一些蓝色菌落（而非白色菌落）对香豆素和 7- 乙氧基香豆素具有明显的氧化活性，而香豆素和 7- 乙氧基香豆素是典型的人类 P450 底物，会产生荧光产物。香豆素被 CYP102A1 突变体氧化后会产生两种代谢物，即 7-羟基香豆素和 3-羟基香豆素。此外，7-乙氧基香豆素会同时通过 O-脱乙基反应氧化成 7-羟基香豆素，并通过 3-羟基反应氧化成 3-羟基、7-乙氧基香豆素。高活性突变体还能代谢其他几种人类 P450 底物，包括苯乙酮、乙氧基瑞舒芬和氯唑沙宗。这些结果表明，靛蓝的形成提供了一种简单的检测方法，可用于鉴定具有更大人类 P450 活性潜力的 CYP102A1 突变体。此外，我们的计算结果表明，结合位点的稳定性与 CYP102A1 突变体对香豆素的催化效率之间存在相关性：结合位点的结构越稳定，能量障碍越低，催化效率越高。
• METHOD FOR PRODUCING GLUCURONIC ACID CONJUGATE USING SACCHAROMYCES CEREVISIAE
  申请人：Toyama Prefecture

  公开号：EP2540826A1

  公开（公告）日：2013-01-02

  Provided is a new method for producing a glucuronide, having excellent productivity and being replaceable with a method using Saccharomyces pombe, and to provide a new means used in this production method. Disclosed are: a transformed Saccharomyces cerevisiae wherein a gene coding for a UDP-glucose dehydrogenase and a gene coding for a UDP-glucose transferase are inserted in a manner such that said genes can be expressed; a transformed Saccharomyces cerevisiae wherein a gene coding for a cytochrome P450 gene is further inserted in a manner such that said gene can be expressed; and a method for producing a glucaronide that includes culturing transformed Saccharomyces cerevisiae in the presence of glucose and a substance to be conjugated, generating the glucuronide of the aforementioned substance to be conjugated.

  本发明提供了一种生产葡萄糖醛酸苷的新方法，该方法具有极高的生产率，可替代使用酿酒酵母的方法，并提供了一种用于该生产方法的新手段。公开了一种转化的酿酒酵母，其中编码 UDP-葡萄糖脱氢酶的基因和编码 UDP-葡萄糖转移酶的基因以能表达上述基因的方式被插入；一种转化的酿酒酵母，其中编码细胞色素 P450 基因的基因以能表达上述基因的方式被进一步插入；以及一种生产葡糖醛酸的方法，包括在葡萄糖和待结合物质存在下培养转化的酿酒酵母，生成上述待结合物质的葡糖醛酸。
• MODIFIED MONOOXYGENASES FOR THE MANUFACTURE OF HYDROXYLATED HYDROCARBONS BASED ON SUBSTITUTION OF AMINO ACIDS BY ALANINE
  申请人：Covestro Intellectual Property GmbH & Co. KG

  公开号：EP3990653A1

  公开（公告）日：2022-05-04
• MODIFIED MONOOXYGENASES FOR THE MANUFACTURE OF HYDROXYLATED HYDROCARBONS
  申请人：Covestro Intellectual Property GmbH & Co. KG

  公开号：EP3990654A1

  公开（公告）日：2022-05-04
• US8741602B2
  申请人：——

  公开号：US8741602B2

  公开（公告）日：2014-06-03