磷酸化蛋白在许多不同细胞网络的调节中发挥重要作用。然而,与含有未修饰的蛋白质
氨基酸的蛋白质的制备不同,后者可以通过定点诱变很容易地改变并在体外和体内表达,在预定位点
磷酸化的蛋白质的制备不能容易地以可接受的产率完成。为了能够合成用于体外研究的
磷酸化蛋白质,我们探索了
磷酸化
氨基酸的使用,其中
磷酸基团带有
化学保护基团,从而消除了对蛋白质翻译有负面影响的负电荷。
磷酸酪氨酸的双邻硝基苄基保护使其能够使用野生型
核糖体并入 DHFR 和 IκB-α,并且精心制作的蛋白质随后可以通过光解进行脱保护。还平行研究了大肠杆菌的 23S rRNA 的重新设计,在使用
磷酸化
嘌呤霉素的指导下,以在体外翻译过程中通过 UAG 密码子抑制来鉴定能够将未受保护的
磷酸酪氨酸纳入来自
磷酸酪氨酸-tR
NACUA 的蛋白质的修饰
核糖体. 选择具有
磷酸化
嘌呤霉素的修饰
核糖体克隆文库鉴定了六种修饰
核糖体变体,它们在 23S rRNA 的核苷酸