摘要:
生成了肌酐特异性抗体,并将其用于高灵敏度和特异性免疫化学肌酐测定。肌酐在 N3 处被衍生化,并与 KLH 载体蛋白偶联。在此免疫原的基础上,通过杂交瘤技术开发出了单克隆抗体。用 BIAcore 2000 对来自不同克隆的抗体的解离常数和特异性进行了鉴定。克隆 B90-AH5 的抗体表现出最低的解离常数(0.74 μM)和对肌酐最高的特异性,因此被选为竞争性 ELISA 和安培肌酐传感器的开发对象。肌酐传感器的制作方法是在铂工作电极的顶部固定一层肌酐修饰膜,然后将其放入搅拌式电化学测量池中。在测定肌酐时,将含肌酐的样品与 B90-AH5 和抗 IgG(小鼠)-葡萄糖氧化酶结合物孵育,然后将其置于测量池中。经过洗涤步骤后加入葡萄糖,产生的过氧化氢在 Eappl = +600 mV 对 Ag/AgCl 时被记录下来。测量范围为 0.01-10 μg/mL。肌酐的最高灵敏度为 330 纳克/毫升(3 μM),检测下限为 4.5 纳克/毫升(40 nM)。这远远低于 5-17 μg/mL (44-150 μM)的相关临床范围,因此可以可靠地测定血清中浓度极低的肌酐,而标准方法则无法应用。每次测量后,用 10 mM HCl 对传感器进行再生,其结合活性没有任何下降。