[EN] A NEW ACHIRAL LINKER REAGENT FOR THE INCORPORATION OF MULTIPLE AMINO GROUPS INTO OLIGONUCLEOTIDES<br/>[FR] NOUVEAU REACTIF DE LIAISON ACHIRAL POUR INCORPORER DE MULTIPLES GROUPES AMINES DANS DES OLIGONUCLEOTIDES
申请人:BEHRENS, Carsten
公开号:WO1997005156A1
公开(公告)日:1997-02-13
(EN) The present invention relates to a new functionalized achiral linker reagent for incorporating multiple primary amino groups or reporter groups into oligonucleotides following the phosphoramidite methodology. It is possible to substitute any ribodeoxynucleotide, deoxynucleotide, or nucleotide with the linker in conventional phosphoamidite or H-phosphonate DNA syntheses. Directly, or via a post modification step, an oligonucleotide is labelled with one or more reporter moieties, e.g. dansyl (5-dimethylamino)-1-naphthalenesulfonyl), biotin, digoxigenin, DOXYL (N-oxyl-4,4-dimethyloxazolidine), PROXYL (N-oxyl-2,2,5,5-tetramethylpyrrolidine), TEMPO (N-oxyl-2,2,6,6-tetramethylpiperidine), dinitrophenyl, texas red, tetramethyl rhodamine, 7-nitrobenzo-2-oxa-1-diazole (NBD), or pyrene. The present invention also relates to a solid phase support, e.g. a Controlled Pore Glass (CPG), immobilized linker reagent, to a method for preparing a labelled oligonucleotide, and to the use of the labelled oligonucleotide as hybridisation probe, in polymerase chain reactions (PCR), in nucleic acid sequencing, in cloning recombinant DNA and $i(in vitro) mutagenesis.(FR) La présente invention se rapporte à un nouveau réactif de liaison, achiral, fonctionnalisé pour incorporer de multiples groupes amines primaires ou des groupes marqueurs dans des oligonucléotides selon la méthodologie phosphoramidite. Il est possible de substituer tout ribodésoxynucléotide, désoxynucléotide ou nucléotide avec le réactif de liaison dans des synthèses classiques d'ADN phosphamidite ou H-phosphonate. Soit directement, soit par l'intermédiaire d'une étape de modification ultérieure, un oligonucléotide est marqué avec une ou plusieurs fractions marqueuses, par exemple: dansyl (5-(diméthylamino)-1-naphtalènesulfonyle), biotine, digoxigénine, DOXYL (N-oxyl-4,4-diméthyloxazolidine), PROXYL (N-oxyl-2,2,5,5-tétraméthylpyrrolidine), TEMPO (N-oxyl-2,2,6,6-tétraméthylpipéridine), dinitrophényle, rouge Texas, rhodamine de tétraméthyle, 7-nitrobenzo-2-oxa-1-diazole (NBD) ou pyrène. La présente invention se rapporte également à un support en phase solide, par exemple un verre à porosité contrôlée (CPG), ou un réactif de liaison immobilisé, à un procédé de préparation d'un oligonucléotide marqué, et à l'utilisation de cet oligonucléotide en tant que sonde d'hybridation dans des réactions en chaîne de la polymérase (PCR), dans un séquençage d'acide nucléique, dans un clonage d'ADN recombiné et dans une mutagenèse $i(in vitro).