[EN] HIGH EXPRESSION NUCLEIC ACID VECTORS<br/>[FR] VECTEURS D'ACIDE NUCLEIQUE A EXPRESSION INTENSIFIEE
申请人:CENTER FOR INNOVATIVE TECHNOLOGY
公开号:WO1995021260A1
公开(公告)日:1995-08-10
(EN) Vector constructs comprising (a) a negatively regulated promoter operably linked to the desired nucleic acid sequence, (b) a runaway replicon, providing multiple copies of the vector construct upon heat induction, and (c) a stabilization locus. The vector constructs will typically be a plasmid, but viral vectors, cosmids, and other nucleic acid vector constructs are also included within the scope of the present invention. In a preferred embodiment, the vector construct further comprises a consensus Shine-Dalgarno sequence (preferably a $i(lac) Shine-Dalgarno sequence), operably linked to the desired nucleic acid sequence, thereby providing for increased translation of the desired nucleic acid sequence; the consensus Shine-Dalgarno sequence may either replace the native Shine-Dalgarno sequence or it may be in addition to such native sequence. Also, methods of producing a desired product encoded by, or resulting from, the desired nucleic acid sequence, bacterial host cells transformed with such vector constructs, and desired products produced according to the methods of the present invention.(FR) Des vecteurs de synthèse comprenant (a) un promoteur à régulation négative et relié activement à la séquence d'acide nucléique désirée, (b) un réplicon fugitif permettant l'obtention de copies multiples du vecteur de synthèse lors de l'induction thermique, et (c) un locus de stabilisation. Les vecteurs de synthèse sont typiquement des plasmides, toutefois des vecteurs viraux, des cosmides et d'autres vecteurs de synthèse d'acide nucléique entrent également dans le cadre de la présente invention. Selon un mode de réalisation préféré, le vecteur de synthèse comprend de plus une séquence consensus Shine-Dalgarno (de préférence une séquence Shine-Dalgarno $i(lac)), reliée activement à la séquence d'acide nucléique désirée, permettant ainsi une translation intensifiée de la séquence d'acide nucléique désirée, la séquence consensus Shine-Dalgarno pouvant soit remplacer la séquence Shine-Dalgarno native, soit être utilisée en complément d'une telle séquence native. L'invention concerne également des procédés permettant d'obtenir un produit requis codé par la séquence d'acide nucléique désirée ou résultant de celle-ci, des cellules hôtes bactériennes transformées à l'aide de tels vecteurs de synthèse, et les produits désirés obtenus selon les procédés de la présente invention.