摘要:
蛋白质的化学交联可以通过引入共价键来稳定非共价复合物。如何找到最快、最有效的交联剂,以最大限度地缩短反应时间并处理微妙的复合物,是一项严峻的挑战。通过引入 N-羟基邻苯二甲酰亚胺、羟基苯并三唑和 1-羟基-7-氮杂苯并三唑作为离去基团,而不是常用的 N-羟基琥珀酰亚胺基团,合成了新的交联剂。然后,利用基质辅助激光解吸电离(MALDI)质谱法,将这些新型交联剂与市售的丁二酰亚胺基辛二酸二酯(DSS)进行了比较,以对谷氨酰化-S-转移酶(GST)二聚体和抗体-抗原复合物进行共价稳定。它们显示出更高的效率,产生的交联复合物比 DSS 多约 30%,反应速度比 DSS 快约 10 倍。利用与 GST 二聚体的反应来了解它们的反应效率和动力学。通过将它们与 GST 和泛素的混合物一起培养,验证了它们只稳定特定蛋白质复合物的能力。最后,交联剂与合成肽进行了孵育,以研究与各种氨基酸侧链结合的选择性。结果发现,不仅赖氨酸,酪氨酸也能与新合成的以 1-hydroxy-7-azabenzotriazole 为活性基团的交联剂发生反应。