[EN] ENZYME-SPECIFIC CLEAVABLE POLYNUCLEOTIDE SUBSTRATE AND ASSAY METHOD<br/>[FR] SUBSTRAT POLYNUCLEOTIDIQUE CLIVABLE SPECIFIQUE D'ENZYMES ET PROCEDE D'ANALYSE ASSOCIE
申请人:MINNESOTA MINING AND MANUFACTURING COMPANY
公开号:WO1999035288A1
公开(公告)日:1999-07-15
(EN) A reagent comprising an enzyme-specific cleavable polynucleotide (30, 31) substrate bearing quenched fluorescent moieties (32, 33) is provided, as is a method of making the same. The polynucleotide (30, 31) includes at least one fluorescent moiety (32) sufficiently close to another fluorescent moiety (33) to essentially quench fluorescence of the moieties (32, 33), wherein the fluorescent moieties (32, 33) become readily detectable by fluorometric techniques upon separation by cleaving the polynucleotide. A biological assay method is also provided wherein the reagent is combined with a test sample potentially containing the enzyme (36) being assayed wherein the enzyme (36) will cleave the polynucleotide to release the fluorescent moieties (32, 33), and produce an increase in fluorescence intensity. The assay method finds use in detection and identification of microorganisms, sterilization assurance, pharmaceutical discovery, enzyme assays, immunoassays, and other biological assays.(FR) L'invention concerne un réactif comprenant un substrat polynucléotidique (30, 31) clivable spécifique aux enzymes comportant des fragments (32, 33) à fluorescence atténuée. L'invention concerne également un procédé de fabrication dudit réactif. Le polynucléotide (30, 31) comprend au moins un fragment fluorescent (32) suffisamment proche d'un autre fragment fluorescent (33) pour atténuer considérablement la fluorescence des fragments (32, 33), qui sont toutefois, facilement détectables par des techniques fluorimétriques à la suite de la séparation par clivage du polynucléotide. L'invention concerne également un procédé d'analyse biologique qui consiste à combiner le réactif à un échantillon de test contenant potentiellement l'enzyme (36) en cours d'analyse. L'enzyme (36) dissocie le polynucléotide de manière qu'il libère les fragments fluorescents (32, 33) et que l'intensité de fluorescence augmente. Le procédé d'analyse peut être appliqué dans la détection et l'identification de micro-organismes, la stérilisation sûre, la recherche pharmaceutique, le dosage d'enzymes, l'immunodosage, et dans d'autres analyses biologiques.