Universal Method for Protein Immobilization on Chemically Functionalized Germanium Investigated by ATR-FTIR Difference Spectroscopy
作者:Jonas Schartner、Jörn Güldenhaupt、Bastian Mei、Matthias Rögner、Martin Muhler、Klaus Gerwert、Carsten Kötting
DOI:10.1021/ja400253p
日期:2013.3.13
spectroscopy. In the next step, the succinimidyl ester was reacted with aminonitrilotriacetic acid. Subsequently, Ni(2+) was coordinated to form Ni-nitrilotriacetic acid for His-tag binding. The capability of the functionalized surface was demonstrated by experiments using the small GTPase Ras and photosystem I (PS I). The native binding of the proteins was proven by difference spectroscopy, which probes
衰减全反射傅里叶变换红外 (ATR-FTIR) 光谱允许对表面附着的分子进行详细分析,包括它们的二级结构、方向以及与蛋白质中小分子的相互作用。在这里,我们提出了一种通用的锗固定技术,用于所有寡聚组氨酸标记的蛋白质。为此,开发了新的三乙氧基硅烷衍生物:我们合成了一种以琥珀酰亚胺酯作为胺反应性头基的连接基硅烷和一种具有非反应性乙二醇基团的基质硅烷。建立了一种在锗上附着三乙氧基硅烷的新方法,并通过 ATR-FTIR 和 X 射线光电子能谱对表面进行了表征。在下一步中,琥珀酰亚胺酯与氨基次氮基三乙酸反应。随后,Ni(2+) 被协调以形成 Ni-次氮基三乙酸用于他的标记绑定。通过使用小 GTPase Ras 和光系统 I (PS I) 的实验证明了功能化表面的能力。蛋白质的天然结合通过差异光谱学证明,其探测蛋白质功能。通过三氟化铍阴离子滴定试验证明了 Ras 作为分子开关的功能,它允许在原子分辨率下观察