Characterization of the ybdT gene product of Bacillus subtilis: Novel fatty acid β-hydroxylating cytochrome P450
作者:Isamu Matsunaga、Atsuo Ueda、Nagatoshi Fujiwara、Tatsuo Sumimoto、Kosuke Ichihara
DOI:10.1007/s11745-999-0431-3
日期:1999.8
characterized the gene encoding fatty acid alpha-hydroxylase, a cytochrome P450 (P450) enzyme, from Sphingomonas paucimobilis. A database homology search indicated that the deduced amino acid sequence of this gene product was 44% identical to that of the ybdT gene product that is a 48 kDa protein of unknown function from Bacillus subtilis. In this study, we cloned the ybdT gene and characterized this gene product
我们已经表征了编码脂肪酸α-羟化酶的基因,该基因是来自鞘氨醇单胞菌的一种细胞色素P450(P450)酶。数据库同源性搜索表明,该基因产物的推导氨基酸序列与ybdT基因产物的推导氨基酸序列具有44%的同源性,后者是来自枯草芽孢杆菌的未知功能的48 kDa蛋白。在这项研究中,我们克隆了ybdT基因,并使用重组酶对该基因产物进行了表征,以阐明ybdT基因产物的功能。重组酶的一氧化碳差异谱显示出P450的特征之一。在过氧化氢的存在下,重组ybdT基因产物羟化肉豆蔻酸,生成β-羟肉豆蔻酸和α-羟肉豆蔻酸,通过高效液相色谱(HPLC)和气相色谱-质谱法测定。这些产物的量随着反应时间的增加和反应混合物中H 2 O 2的量的增加而增加。在反应期间的所有时间,β-羟基产物的量均略高于α-羟基产物的量。但是,当使用热灭活的酶时,在任何时间或任何浓度的H2O2下都没有检测到反应产物。用手性柱的HPLC分析表明,