苯甲酰
辅酶A:
邻氨基苯甲酸N-苯甲酰转移酶催化康乃馨(Dianthus caryophyllus L.)中植物抗毒素
生物合成的第一个确定的反应,产物N-苯并
氰基
邻氨基苯甲酸是数种双
蒽酰胺的前体。转移酶活性在悬浮培养的康乃馨细胞中组成性表达,可以通过添加酵母
提取物快速诱导。该酶从酵母诱导的康乃馨细胞中纯化至均一,并显示由53 kDa的一条
多肽链组成。通过胰
蛋白酶解肽的微测序鉴定出大约20%的序列,并且其中一些序列在一些
氨基酸残基上有所不同,仅表明存在同工酶。通过RT-PCR产生了特异性的0.8 kb cDNA探针,使用与两个胰
蛋白酶解肽互补的简并寡核苷酸引物,并使用来自康乃馨细胞的poly(A)+ RNA。从一个cDNA文库中分离出五个不同的苯甲酰转移酶克隆,并对三个cDNA PChcbt1-3进行了测序,结果表明它们编码全长N-苯甲酰转移酶。翻译的肽序列显示出这三个克隆中超过95%的同一性。另外两个克隆具有大多数与PChcbt