inhibition observed at 10 to 30 micro M. Growth was rescued by increasing the SPase levels. The cell-based assay was used to test cellular inhibition of SPase by compounds that inhibit the enzyme in vitro. MD1, MD2, and MD3 are SPase inhibitors with antimicrobial activity against Staphylococcus aureus, although they do not inhibit growth of E. coli. MD1 presented the best spectrum of antimicrobial activity
大肠杆菌表达不足的lepB用于测试细胞对信号肽酶I(
SPase)的抑制作用。为了构建lepB可调节菌株,将大肠杆菌lepB
基因克隆到pBAD中,其表达依赖于
L-阿拉伯糖。lepB的染色体拷贝被
卡那霉素抗性
基因取代,随后被去除。通过蛋白质印迹分析监测在各种浓度的
L-阿拉伯糖存在下由lepB可调节菌株产生的
SPase。在较低的
阿拉伯糖浓度下,生长进行得较慢,这可能是由于细胞中
SPase
水平降低所致。当在100 micro M下测试时,对大肠杆菌几乎没有抗菌活性的Penem
SPase
抑制剂被用于验证基于细胞的系统。lepB的低表达使细胞对
青霉素敏感,在10到30 micro M处观察到完全的生长抑制。通过增加
SPase
水平可以挽救生长。基于细胞的测定法被用于测试化合物在体外对
SPase的细胞抑制作用。MD1,MD2和MD3是
SPase
抑制剂,对
金黄色葡萄球菌具有抗菌活性,尽管它们不抑制大肠杆菌