摘要:
本发明提供了用于分析细胞、组织和动物中代谢活性的方法、组合物、基质和试剂盒,以及用于筛选测试化合物对细胞色素P450活性影响的方法。具体来说,提供了使用发光分子(例如luciferin或coelenterazines)的一步和两步方法,这些分子是细胞色素P450的底物,同时也是生物发光酶(例如luciferase)的前体底物。将luciferin衍生物或其他发光分子加入到P450反应中后,P450酶将将该分子代谢成生物发光酶底物,例如luciferin和/或luciferin衍生物代谢物,在P450反应中。生成的代谢物作为生物发光酶(例如luciferase)的底物,在第二个生成光的反应中发挥作用。公开了低背景信号和高灵敏度的发光细胞色素P450测定方法,并展示了异构体选择性。本发明还提供了一种改进的进行luciferase反应的方法,该方法使用添加的焦磷酸酶来去除无机焦磷酸盐,这是一种可能存在于反应混合物中的luciferase抑制剂,或者在反应过程中生成的污染物。本方法还提供了一种使用可逆luciferase抑制剂等luciferase稳定剂来稳定和延长luciferase基础测定中的发光信号的方法。