摘要:
                                在激酶的催化下,丝氨酸/苏氨酸和酪氨酸磷酸化是细胞内调节的重要机制。因此,轻松监测激酶活性的分析在学术和制药环境中都至关重要。我们之前开发了基于 sulfonamido-oxine (Sox) 的荧光肽,遵循 β 转聚焦 (BTF) 设计,用于在体外和细胞裂解物中连续测定激酶活性。含 Sox 的肽磷酸化后,发色团与 Mg (2+) 结合并发生螯合增强荧光 (CHEF)。尽管该设计已成功应用于多种激酶传感器的开发,但一个内在限制是只能使用磷酸化残基的 C 端或 N 端残基来推导出对目标激酶的特异性。为了解决这个限制,一个新的,开发的识别域聚焦 (RDF) 策略也依赖于 CHEF。在这种方法中,通过使用基于 Sox 的衍生物对半胱氨酸残基进行烷基化以提供称为 C-Sox 的氨基酸,消除了对受限 β-转角基序的要求。RDF 设计允许包含扩展的结合决定簇,以最大限度地提高同源激酶的识别率,现在允许构建用于各种代表性