摘要:
该手稿描述了初步实验的结果,该实验作为对蛋白质进行绝对定量而不使用标准蛋白质的新方法的“概念证明”。绝对定量在蛋白质组学领域仍然是一个具有挑战性的问题。因此,我们提出了[ 13 C 6 ]-苯基异硫氰酸酯(PITC)和Edman降解反应的组合作为可能的突破。[ 13 C 6 ] -PITC是由[ 13 C 6 ]-苯胺与O, O'-di -2-吡啶硫碳酸酯合成的,以制备[ 13 C 6]-苯硫基乙内酰脲(PTH)-氨基酸作为内标。埃德曼降解反应后,已证实模型蛋白牛血清白蛋白(BSA)以PTH-Asp的形式定量释放N末端氨基酸。PTH-Asp相对于[ 13 C 6 ] -PTH-Asp的标准曲线显示出良好的线性(r 2 = 0.9977)。可使用标准曲线将BSA量化为PTH-Asp。此外,残留的des-Asp 1 -BSA为进一步的蛋白质鉴定提供了足够的信息。版权所有©2009 John Wiley&Sons,Ltd