摘要:
一种催化S-腺苷甲硫氨酸对异丁醛肟进行O-甲基化的酶被从假单胞菌Pseudomonas sp. N.C.I.B. 11652中分离出来。该酶通过DEAE纤维素色谱、(NH4)2SO4分级、Sephadex G-100凝胶过滤和磷酸钙凝胶层析进行了220倍的纯化。通过聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦和十二烷基硫酸钠/聚丙烯酰胺凝胶电泳证实了酶制备的同质性。该酶在pH值为10.25时具有较窄的pH最适值,需要巯基保护剂才能发挥活性,并且在35℃以上的温度下迅速变性。异丁醛肟和S-腺苷甲硫氨酸的Km值分别为0.24 mM和0.15 mM。底物特异性研究表明,攻击主要限制在C4-C6醛肟上,对2-或3-位置分支的醛肟表现出优先选择。酮肟不是该酶的底物。Sephadex G-100凝胶过滤法得到的完整酶的分子量为84,000,十二烷基硫酸钠/聚丙烯酰胺凝胶电泳法表明分子量为37,500,表明完整酶中存在两个亚基。S-腺苷同型半胱氨酸是S-腺苷甲硫氨酸的强竞争性抑制剂,Ki值为0.027 mM。该酶也容易受到巯基阻断试剂和重金属离子的抑制。Mg2+对于最大活性不是必需的。