Intracellular Protein Labeling with Prodrug-Like Probes Using a Mutant β-Lactamase Tag
作者:Shuji Watanabe、Shin Mizukami、Yuri Akimoto、Yuichiro Hori、Kazuya Kikuchi
DOI:10.1002/chem.201100973
日期:2011.7.18
Intracellular protein labeling with small molecular probes that do not require a washing step for the removal of excess probe is greatly desired for real‐time investigation of protein dynamics in living cells. Successful labeling of proteins on the cell membrane has been performed using mutant β‐lactamase tag (BL‐tag) technology. In the present study, intracellular protein labeling with novel cell
实时研究活细胞中蛋白质动力学非常需要使用不需要清洗步骤即可去除过量探针的小分子探针进行细胞内蛋白质标记。使用突变的β-内酰胺酶标签(BL-tag)技术已经成功标记了细胞膜上的蛋白质。在本研究中,描述了使用基于β-内酰胺前药的新型细胞膜可渗透探针标记细胞内蛋白。基于前药的探针迅速渗透到活的哺乳动物细胞的质膜中,并在低探针浓度下有效标记细胞内蛋白质。由于这些可渗透细胞的探针仅在细胞内部被激活,因此通过使用可渗透细胞和不可渗透探针可以同时区分细胞内和细胞表面的BL-tag融合蛋白。因此,通过双色荧光技术,该技术可以与不同的颜色探针一起,充分区分带有相同蛋白质标签的蛋白质的位置。此外,由于BL标记技术与基于前药的探针的结合,可以有效地标记目标蛋白,而无需执行洗涤步骤,这是由于探针有效地进入细胞内以及在生物激活后使用BL标记技术实现了快速的共价标记。这种基于前药的BL标签探针设计策略提供了一种简单的